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上海仁捷生物-ELISA(雙抗體夾心法)檢測HBsAg

更新時間:2017-06-22      瀏覽次數:1909

ELISA實驗技巧:ELISA(雙抗體夾心法)檢測HBsAg

以已知抗體(抗HBs)包被載體,然后將含有抗原的待檢標本加入,共同孵育后,抗原結合于包被抗體上,再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs),酶標抗體連接到抗原上,zui后加入底物溶液,根據顏色反應來判定抗原含量。
ELISA(雙抗體夾心法)檢測HBsAg
【材料】HBsAg試劑盒,本試劑盒含:
1、包被抗-HBs反應條
1瓶
2、酶結合物
1瓶
3、HBSAg陽性對照
1瓶
4、HBsAg陰性對照
1瓶
5、洗滌液:用前每瓶作1:20稀釋
1瓶
6、顯色劑(TMB)A
1瓶
7、顯色劑(TMB)B
1瓶
8、終止液
1瓶

【方法】

1、加入待測標本每孔0.05ml,并設HBsAg陽性對照2孔,HBsAg陰性對照2孔,空白對照1孔,然后加入酶結合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加),充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2、洗板:棄去反應條孔內液體、拍干、用洗滌液注滿每孔,棄去拍干,反復五次后拍干。
3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),混勻,37℃孵育10分鐘。
4、每孔加終止液1滴(0.05ml),混勻。

【結果】

比色法:波長450nm,先用空白孔校零點,然后讀取各孔光密度值。
樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性,否則為陰性。
備注:陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算,高于0.05按實際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8,實驗結果有效。

【注意事項】
1、試劑盒置2℃~8℃保存。
2、使用前試劑應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加。
3、從冷藏環境中取出試劑盒內全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔條,置室溫平衡30分鐘后再行測試,余者應及時封存于冰箱中以備后用。
4、待測標本不可用NaN3防腐。
5、不同批號試劑請勿通用。
6、結果判斷須在10分鐘內完成。
7、若濃縮洗滌液出現結晶時,請置37℃至溶解。

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